PCR定量試劑盒的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。

　　

　　PCR熒光定量是一種非常敏感的檢測方法，但是實驗室經(jīng)常開展檢測工作，一旦實驗室管理和環(huán)境控制沒有執(zhí)行到位，就存在由于交叉污染出導致假陽性的風險。

　　

　　PCR定量試劑盒檢測出現(xiàn)假陽性的常見原因：

　　

　　1、實驗室污染是導致假陽性結果

　　

　　實驗室如果長期檢測陽性樣本，擴增產(chǎn)物中高濃度的目的片段很容易擴散到空氣中并不斷累積導致氣溶膠污染。

　　

　　2、熒光定量PCR儀性能不佳導致翹尾

　　

　　某些熒光定量PCR儀性能不佳，在反應后期出現(xiàn)非特異性翹尾峰。

　　

　　3、電壓不穩(wěn)導致的基線不穩(wěn)定

　　

　　電壓不穩(wěn)定，會導致擴增基線不穩(wěn)定。另外，臨床實驗室停電風險相對較高。建議這些實驗室配備UPS緊急電源。

　　

　　4、樣本或者氣泡干擾

　　

　　反應體系中存在氣泡或者某些樣本含有特殊成分可能干擾實驗，產(chǎn)生非特異性擴增曲線，這種擴增曲線通常不呈現(xiàn)典型的S型擴增曲線形態(tài)。

　　

　　5、定量試劑盒污染或者非特異性反應

　　

　　某些試劑盒沒有在GMP車間進行生產(chǎn)，或者GMP車間生產(chǎn)過程中車間潔凈度不夠或人員操作不規(guī)范，在試劑盒生產(chǎn)過程中可能出現(xiàn)陽性核酸片段或者質(zhì)粒污染反應體系的情況。

　　

　　某些PCR定量試劑盒的生產(chǎn)工藝不過關，可能出現(xiàn)非特異性翹尾現(xiàn)象。試劑盒中引物、探針等原料品質(zhì)不過關，質(zhì)量控制不嚴格，也可能導致非特異性反應。